Как работает вестерн-блоттинг на ВИЧ

Posted on
Автор: Joan Hall
Дата создания: 4 Январь 2021
Дата обновления: 19 Май 2024
Anonim
Иммуноблоттинг: компоненты и механизм метода | Микробиология
Видео: Иммуноблоттинг: компоненты и механизм метода | Микробиология

Содержание

Тестирование на ВИЧ обычно представляет собой многоэтапный процесс. Первый используемый тест - это обычно тест с высокой чувствительностью. Тесты с высокой чувствительностью предназначены для выявления как можно большего числа потенциальных ВИЧ-инфекций. Затем за первым тестом следует один или несколько высокоспецифичных тестов, чтобы исключить возможные ложноположительные диагнозы ВИЧ. Исторически сложилось так, что наиболее распространенным из высокоспецифичных тестов, используемых в подтверждающем тестировании, является Вестерн-блоттинг, однако сейчас предпочтение отдается другим подтверждающим тестам. Вестерн-блот был исключен из рекомендованного Центром контроля и профилактики заболеваний алгоритма лабораторного тестирования на ВИЧ в 2014 году в пользу использования тестов на антитела / антиген четвертого поколения для подтверждения положительного первоначального скринингового теста.

Как работает вестерн-блоттинг?

Вестерн-блоттинг также известен как белковый иммуноблот. Эти тесты используются для обнаружения определенных белков в образце. Основная методика вестерн-блоттинга включает сортировку белков на геле по длине. Затем эта сетка проверяется антителами, которые реагируют на конкретные белки, которые ищутся.


Однако, когда для тестирования на ВИЧ используется вестерн-блоттинг, этот процесс фактически выполняется в обратном порядке. Обычно при Вестерн-блоттинге неизвестные белки ищут с помощью известных антител. Однако при проведении Вестерн-блоттинга на ВИЧ ученые работают с подготовленными образцами белков ВИЧ и проверяют, есть ли в крови человека какие-либо антитела, которые прилипают к ним.

Тесты на ВИЧ с помощью вестерн-блоттинга обычно ищут антитела против следующих белков ВИЧ:

  • Белки из оболочки ВИЧ: gp41 и gp120 / gp160.
  • Белки ядра вируса: p17, p24, p55
  • Ферменты, которые ВИЧ использует в процессе заражения: p31, p51, p66

Чтобы человек считался ВИЧ-инфицированным, он должен иметь антитела против одного из белков оболочки. и один из основных белков или против одного из ферментов. Если у человека есть антитела против другой комбинации белков, их результаты обычно считаются неопределенными. Точный алгоритм объявления результата неопределенным зависит от каждого конкретного теста вестерн-блоттинга. Однако цель всегда состоит в том, чтобы снизить риск ложноположительного теста, который расстроит кого-то без причины.


Неопределенные результаты вестерн-блоттинга могут быть признаком новой ВИЧ-инфекции. Эти результаты тестов также могут быть получены, когда люди подвергались воздействию других ретровирусов, таких как HTLV, или инфицированы ими. Как правило, если человек с неопределенным тестом на ВИЧ с помощью вестерн-блоттинга действительно является ВИЧ-положительным, его тест с помощью вестерн-блоттинга становится явно положительным по прошествии некоторого времени.

Тесты вестерн-блоттинга используются в качестве подтверждающих тестов, а не в качестве первичных, поскольку они менее чувствительны, чем тесты ELISA первого раунда или тесты обнаружения РНК. Это означает, что они с меньшей вероятностью обнаружат инфекцию. Однако Вестерн-блоттинг также с меньшей вероятностью даст ложноположительный результат при использовании для подтверждения первоначального положительного результата.

Если вам сказали, что у вас есть неопределенный вестерн-блоттинг

Когда говорят, что результаты Вестерн-блоттинга не определены, это может быть чрезвычайно стрессовым для людей, проходящих тестирование на ВИЧ. Есть множество причин не связано с контактом с ВИЧ Это может привести к такому результату.Однако людям с неопределенным методом вестерн-блоттинга обычно рекомендуется пройти повторное тестирование либо сразу, либо по прошествии некоторого времени.


Немедленная повторная проверка проверяет, не было ли ошибок в методе проведения вестерн-блоттинга. Напротив, ожидание месяца или более перед повторным тестированием дает иммунной системе человека время для выработки дополнительных антител против антигенов ВИЧ, если они действительно были инфицированы ВИЧ.

Повторное тестирование часто приводит к однозначно положительному или отрицательному результату неопределенного Вестерн-блоттинга. Однако, если повторные тесты продолжают посылать запутанные сигналы, врачам, возможно, придется переключиться на использование других методов определения наличия у вас ВИЧ-инфекции. Ни один тест на ВИЧ не подходит для любой ситуации.